Compound Action Potential 실습
준비
Recording 준비
Amplifier & DAC + 신경 chamber + 기록용 PC or Mac (조별 1대씩 지참)
- Recording용: 채널1 (+)전극 ⟷ 채널1 (-)전극
- 접지용: (C)전극
- Stimulation용: (+)전극 ⟷ Stimulation (-)전극
- Recording용: iWire-B3G 를 iWire 1 input 에 연결
- Stimulation용: C-BNC-P2 케이블을 IXTA의 Stimulator 1 BNC 단자에 연결
Software 준비
소프트웨어(LabScribe) 설치:
- (Windows만 해당) iWorx drivers not installed 메세지가 뜨거나 장비 연결시 Hardware not detected 에러가 뜨면,
LabScribe을 끄고 iWorx214(혹은 IXTA)장비를 다시 연결한다.
- New Hardware Detected 메세지와 함께 New Device Hardware 마법사가 실행되면,
"드라이버의 위치를 알고 있다"고 하고 다음 위치를 알려준다: C:₩Program Files₩iWorx₩LabScribe₩drivers
드라이버 설정이 끝나면 LabScribe을 다시 시작한다.
- (Windows만 해당) New Hardware Detected 메세지도 안 뜨면,
- iWorx 214(혹은 IX-TA)를 컴퓨터에 USB 케이블로 연결한다.
- 화면 좌측 아래 검색창에서 "장치"를 검색하여 "장치 관리자"를 실행한다.
- 또는, 화측 아래 Windows 아이콘에서 우클릭하여 "장치 관리자"를 실행한다.
- 리스트 중 "알 수 없는 장치"를 선택해서 드라이버 설치를 시도한다.
"드라이버의 위치를 알고 있다"를 선택한 후 "C:₩Program Files₩iWorx₩LabScribe₩drivers" 이 위치를 지정한다.
드라이버를 새로 다운 받아야 한다면 여기서 받아 압축 푼다
소프트웨어(LabScribe) 실행:
iWorx214가 연결된 상태로 LabScribe을 실행하면 iWorx214(혹은 IX-TA)가 자동으로 인식된다.
- IWX214를 찾을 수 없다는 메세지가 나오면 위 driver 수동 설치 과정을 수행한다.
기본 사용법: YouTube
기타 일반적인 사용법: https://www.iworx.com/teaching-landing/teaching-videos/
- Compound Action Potential용 setting 설정 불러오기
Settings를 다운받아 압축을 푼다
- 메뉴 ➔ Settings ➔ Load Group ➔ [위 압축 푼 위치 찾기] ➔ SNUSD_Physiol01.iwxgrp 선택
- 메뉴 ➔ Settings ➔ Animal Nerve ➔ Compound Action Potential 선택
만약 2번 과정을 거쳐도 Settings에 Animal Nerve가 보이지 않는다면 LabScribe을 재실행 할 것
- Setting을 불러오면 관련 매뉴얼.pdf가 같이 열림
LabScribe의 메뉴에서 Experiment를 선택하면 추가 매뉴얼.pdf 선택 가능
기본 사용법: YouTube
신경 샘플 준비
- 개구리를 얼음에 15분간 넣어서 활동성을 줄인다.
Pithing: 송곳 같은 기구로 CNS를 파괴하는 행위
개구리 신경 적출 YouTube
- 다리 skin 벗기기
Urostyle bone(골반뼈 일부) 제거 후 sciatic nerve를 찾아서 실로 묶기 (손잡이 역할)
다리 근육을 포셉으로 찢으면서 sciatic nerve의 distal end 찾아 실로 묶기
- 닭고기 찢는 듯한 느낌으로 찢으면 잘 분리됨
- sciatic nerve는 길수록 좋음. 최대한 길게 뽑을 것.
- Sciatic nerve 양 끝단에 실 묶은 곳 바깥쪽을 가위로 자르고 실을 이용해서 신경을 적출함.
- Recording chamber에 위치시키고 개구리 링거액을 수시로 뿌려서 마르지 않게 유지
실험
Research Questions
- Threshold 관찰: 자극의 Amplitude와 duration 중 어떤 것이 더 중요한가?
- Bidirectionality: 신호의 전달 방향이 양방향 vs. 단방향?
- Refractory Period
- 여러 신경세포의 전달속도 차이 (nerve와 neuron 구별할 것)
- Blocker에 의한 효과 관찰
Trouble Shooting
- 확인사항
- Nerve chamber에 nerve가 있고, Stimulation 전극(+/-)과 Recording 전극(+/-)이 신경에 닿았는지?
- Stimulation용 + 전극과 - 전극은 iWorx-214 Amplifier의 Stimulation 단자에 연결되었는지?
- Recording용 + 전극과 - 전극은 iWorx-214 Amplifier의 Channel 1 단자에 연결되었는지?
- 링거액이 전극에 닿지 않았는지? (Stimulation 전기 신호가 신경이 아닌 전해질 용액을 통해 Recording 전극으로 전달될 수 있음)
- Ground 전극은 Stimulation 전극과 Recording 전극 사이에 위치했는지?
- 기본조작
- 화면 조절
숫자로보기 | 위치 Mark하기 | Stimulation 메뉴보기
x축(Time) scale x 1/2 | 커서 사이 확대 | x축(Time) scale x2 | y축 scale 자동 조절
- Stimulation 메뉴 조작
- Pulse, Amplitude, Number of Pulses, Width(duration), T off(다음 pulse까지 대기 시간)
Parameter 조작 후 Apply 버튼을 꼭 눌러줘야 함
Data Export: MatLab, Excel 지원함
- 화면 조절
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